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技術(shù)原理

Pull-Down是體外驗(yàn)證蛋白與蛋白互作關(guān)系的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。該技術(shù)主要原理是將GST融合蛋白作為誘餌蛋白，其可與固定在固相支持物上的GSH(谷胱甘肽)結(jié)合，與蛋白樣品或細(xì)胞/組織裂解液共孵育,即可捕獲樣品中與誘餌蛋白互作的蛋白。接著通過(guò)洗滌或洗脫過(guò)程去除其余物質(zhì)，并將捕獲的蛋白回收，進(jìn)行WB或質(zhì)譜等檢測(cè)分析，從而證實(shí)兩種蛋白間的互作關(guān)系或純化出相應(yīng)的目的蛋白。

技術(shù)應(yīng)用

    Pull-Down技術(shù)可以通過(guò)體外分析出蛋白與蛋白之間的互作關(guān)系；可以與酵母雙雜交以及BiFC結(jié)果相互驗(yàn)證；亦可用于未知蛋白的鑒定。

服務(wù)流程

客戶(hù)提交實(shí)驗(yàn)詳細(xì)信息(驗(yàn)證蛋自的ORF序列，蛋白結(jié)構(gòu)等)—對(duì)客戶(hù)提交信息和材料的確認(rèn)—構(gòu)建候選蛋白加標(biāo)簽的原核表達(dá)載體—收集和純化候選蛋白—混合和分離候選蛋白—Western Blot檢測(cè)—撰寫(xiě)提交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

（1）提供目標(biāo)蛋白原核表達(dá)載體序列信息；

（2）蛋白的收集和純化詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟；

（3）候選蛋白混合與分離的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟；

（4）Western Blot檢測(cè)結(jié)果。